简介： 本发明涉及一种脱氮假单胞菌发酵生产维生素B12的培养基及发酵方法及利用其生产维生素B12的方法，该培养基包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于上述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基中均含有人工糖蜜，该人工糖蜜是由麦芽糖、硫胺素、核黄素和生物素组成。本发明通过采用由麦芽糖、硫胺素、核黄素和生物素组成的人工糖蜜替代甜菜糖蜜，优化其培养基配方，从而解决了因甜菜糖蜜质量不稳定导致发酵效价波动范围大的问题，并获得了一种稳定、有效地生产维生素B12的方法。本发明节约了原辅料用量，降低综合成本，减少废水排放。