简介： 本发明公开了一种消除交叉污染的闭管可视化PCR检测方法。在PCR反应之前利用Cas12a蛋白的顺式切割活性特异性地破坏管底的交叉污染物；利用PCR反应使管底的Cas12a蛋白变性，消除其对PCR反应的抑制作用，获得扩增产物；利用海藻糖对提高Cas12a蛋白热稳定性的作用、矿物油隔热的作用和PCR仪器的管盖控温的作用，防止管盖上的Cas12a蛋白失活，从而利用其反式切割活性特异性地检测扩增产物，实现了交叉污染消除、PCR扩增和荧光可视化检测的闭管联用。该方法具有特异性强、准确性高、操作及引物、crRNA、探针序列设计简单、闭管操作、高效消除交叉污染的特点，为核酸定性分析提供了新的途径。