简介： 本发明公开了一种基于同源重组原理的极端嗜酸性氧化亚铁硫杆菌无标记基因敲除方法,步骤包括初始质粒、含有要敲除靶基因上下游同源片段的自杀质粒和含酵母核酸内切酶I-SceI基因的诱导质粒的构建,自杀质粒和诱导质粒向嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的接合转移,发生第一次同源重组单交换子和第二次同源重组双交换突变株的筛选和鉴定。本发明首次实现了嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的无标记基因敲除,能快速、稳定、高效地敲除该菌的基因,不仅可用于该菌基因的功能和代谢机制研究,进行遗传性状改造,构建高效浸矿工程菌;而且获得的突变株不携带任何抗性基因,既可以作为出发菌株进行后续不同位点的基因敲除和改造,还可以安全用于大规模工业生产。