简介： 本申请公开了一种制备腺苷酰化接头的方法，包括：(1)先合成一段寡核苷酸，寡核苷酸5’端磷酸化修饰，3’端进行氨基修饰、双脱氧胞嘧啶、磷酸修饰、荧光标记修饰、倒转碱基修饰或生物素标记修饰中的一种；(2)将步骤(1)的寡核苷酸在非截短型的T4RNA连接酶1催化下与ATP反应，获得腺苷酰化接头。本申请的制备方法，打破传统化学合成腺苷酰化接头的思维限制，先合成寡核苷酸，T4RNA连接酶1将ATP分解成AMP，AMP转移到磷酸上，形成腺苷酰化，由于3’端修饰，寡核苷酸保持在腺苷酰化中间态，从而制备出腺苷酰化接头。本申请的制备方法成本低、效率高，能满足使用需求，有效的降低了RNA高通量测序的成本。