简介： 本发明公开了一种荧光探针及其制备方法与应用，其结构式如下式Ⅰ所示：荧光探针的制备方法，包括如下步骤：将对硝基苯甲醛，2, 5-二甲基吡嗪和催化剂混合得到混合液，将混合液加热至150-180℃，反应，得到PY-NO2；在PY-NO2中加入多硫化钠，反应，得到PY-NH2；将PY-NH2、咖啡酸、三乙胺、HOBT和EDC.HCL加入到二氯甲烷和DMF的混合溶剂中得到混合液；所述混合液在惰性气体的保护下，搅拌，得到双光子荧光探针的粗产品，纯化后，得到双光子荧光探针纯品。本发明的荧光探针的化学稳定性，光物理稳定性好；在酸性、中性和碱性中对O2˙-都能响应敏感，测定灵敏度较高，且响应时间极短。