简介： 本发明公开了生产MSTN双侧基因敲除的双肌性状体细胞克隆猪的方法，其利用高效简便的基因修饰技术TALEN技术，设计构建能高效敲除MSTN基因的质粒；通过电转染法转染猪胎儿成纤维细胞，磁珠分选阳性细胞作为供体细胞，化学辅助去核方法去核后进行体细胞核移植；经胚胎移植确定妊娠后26-36天取出胎儿进行基因测序，以MSTN双侧基因敲除胎儿细胞作为供体细胞再次体细胞核移植，胚胎移植；足月分娩后免疫组化及形态学观察，确定为双肌性状克隆猪。获得MSTN-/-双侧敲除的双肌性状克隆公猪，取精液对发情母猪进行人工受精，获得大量双肌猪。本发明工艺简单，易于实施，且可产业化生产双肌猪，利于农业生产和医学研究。