简介： 本发明涉及一种2‑甲基柠檬酸高产基因工程菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明的2‑甲基柠檬酸高产基因工程菌是由苏云金芽胞杆菌BMB171基因组中敲除2‑甲基柠檬酸脱水酶基因prpD而得到的。本发明还提供了上述2‑甲基柠檬酸高产基因工程菌的构建方法，以苏云金芽胞杆菌BMB171为出发菌株，利用基于归巢内切酶I‑SceI诱发染色体同源重组机制的基因敲除体系成功获得2‑甲基柠檬酸脱水酶(PrpD)基因无痕缺失突变株ΔprpD。通过液相色谱和质谱的检测发现，与出发菌株BMB171相比，ΔprpD菌株胞内2‑甲基柠檬酸浓度提高了217倍，且与化学法合成的2‑甲基柠檬酸相比，本发明法所产生的2‑甲基柠檬酸空间构型专一。