简介： 本发明提供了一种从头合成核黄素的大肠杆菌工程菌的构建方法，涉及基因工程领域，所述方法包括：对来自枯草芽孢杆菌的26个合成核黄素的基因进行结构优化，并化学合成，获得了优化后的26个基因；选择T7启动子和终止子控制所述优化后的26个基因的表达，完成优化后的26个基因原核表达单元的拼接；构建了两个不同复制起点和抗性标记的质粒pBR326和pYB8895，在两个相容质粒基础上组装了核黄素从头生物合成途径4大功能模块；将带有4大功能模块的双质粒转入带有T7RNAP基因的大肠杆菌，获得了从头合成核黄素的含枯草杆菌26个基因原核表达单元的大肠杆菌工程菌株。通过摇瓶发酵实验来检验其生成核黄素的能力，最终通过HPLC质谱法测得其核黄素产量达到0.55g/L。