简介： 本发明涉及生物化学领域，尤其涉及一种制备环孢菌素D的闭路循环高速逆流色谱方法。本发明改装了常规逆流色谱仪器，在检测器和恒流泵之间增加一个六通阀，使得流动相可以实现闭路循环，在实现柱体积的无限延长的同时，找到了合适的溶剂体系，从而实现从粗体物中一步分离制备到高纯度的环孢菌素D，所述的溶剂体系由正己烷、乙腈、水组成，其用量体积比为10:10：（0～1）。本方法具有操作简单，分离量大，纯度高，耗时短，大大节约有机溶剂的优点。