简介： 本发明提供一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物及其制备方法及应用。所述的突变型蛋白酶3的氨基酸序列的36位点、48位点或74位点的氨基酸突变为带有叠氮基团和炔基中的一者的非天然氨基酸，所述的生物素为具有炔基或叠氮基团中的另一者的生物素衍生物，所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物由所述的非天然氨基酸和所述的生物素衍生物发生点击化学反应而得。本发明可操作性强，反应效率高，条件温和，在提高了生物素标记效率的同时，增强了抗原抗体结合的反应性，提高了抗蛋白酶3抗体检测的灵敏度和准确性，在临床应用中具有广阔前景。