简介： 本发明涉及分析化学和翻译后修饰蛋白组学领域。本发明提供一种富集分离磷酸化蛋白的方法，该方法是以多氢键响应性聚合物作为富集材料，采用柱固相萃取模式或分散固相萃取模式从复杂生物样品中提取出磷酸化蛋白。所述多氢键响应性聚合物材料是利用表面引发‑原子转移自由基聚合方法将异丙基丙烯酰胺和硫脲衍生物在基底材料表面共聚所得。该方法通过优化上样液，淋洗液和洗脱液的有机溶剂种类和浓度、缓冲盐类型和浓度、pH、温度等富集参数，实现了对磷酸化蛋白的高选择性富集。该方法具有选择性高、吸附量大、方法灵活可控、操作简便易行等优点，适用于生物样品中磷酸化蛋白的高选择性富集。