简介:
本发明公开了Click‑iG:一种多类型完整糖肽的鉴定方法,具体是利用非天然糖代谢标记技术,在细胞或活体组织样品中多种类型糖基化修饰蛋白的聚糖链上引入一个叠氮基团,然后通过生物正交的点击化学反应,使糖蛋白的聚糖链上连接有生物素基团标签,随后将蛋白酶解为肽段,再通过链霉亲和素‑生物素相互作用对糖基化修饰肽段进行富集,最后通过基于sceHCDpdEThcD碎裂技术的静电轨道离子阱高分辨质谱进行质谱鉴定,并使用pGlyco3软件进行搜库分析。所述的方法流程具有鉴定糖基化修饰种类多、修饰位点信息与糖链组成信息完全、鉴定覆盖度高等优点,可以对复杂生物样品的N‑糖基化、黏蛋白型O‑糖基化和O‑GlcNAc糖基化完整糖肽进行统一鉴定,从而实现对同一样品中多类型糖基化修饰组学的综合研究。
本发明公开了Click‑iG:一种多类型完整糖肽的鉴定方法,具体是利用非天然糖代谢标记技术,在细胞或活体组织样品中多种类型糖基化修饰蛋白的聚糖链上引入一个叠氮基团,然后通过生物正交的点击化学反应,使糖蛋白的聚糖链上连接有生物素基团标签,随后将蛋白酶解为肽段,再通过链霉亲和素‑生物素相互作用对糖基化修饰肽段进行富集,最后通过基于sceHCDpdEThcD碎裂技术的静电轨道离子阱高分辨质谱进行质谱鉴定,并使用pGlyco3软件进行搜库分析。所述的方法流程具有鉴定糖基化修饰种类多、修饰位点信息与糖链组成信息完全、鉴定覆盖度高等优点,可以对复杂生物样品的N‑糖基化、黏蛋白型O‑糖基化和O‑GlcNAc糖基化完整糖肽进行统一鉴定,从而实现对同一样品中多类型糖基化修饰组学的综合研究。