简介： 本发明涉及生物化学领域，具体涉及一种胰岛素及其类似物O‑糖基化位点的鉴定方法。首先对胰岛素及其类似物进行弹性蛋白酶酶切，通过LC‑MS分析肽图谱，初步确定相应的糖基化肽段；然后对糖基化关键肽段进行Q‑TOF‑MS/MS分析，通过优化关键肽段的CID质谱碎裂能量，得到关键的带糖的碎片离子，从而更准确和简便的分析O糖基化位点。本发明在常规CID碎裂技术下即可实现复杂肽段的糖基化位点分析和确认，操作简单，准确度高，实用性强，经济，适用于所有带有CID碎裂技术的质谱仪，为糖基化类的翻译后修饰分析以及在蛋白质组学中的应用提供了一种新的思路。