简介： 本发明属基因工程技术领域,具体地说是乳腺癌细胞C35基因siRNA序列的设计,表达载体的构建及其在抗肿瘤治疗中的应用。本发明根据siRNA的设计原则,分别选择C35蛋白编码区259nt-278nt,编码区282nt-300nt的核苷酸序列,设计相应的siRNA,用BLAST软件进行同源分析证实为C35高度保守序列后,化学合成单链寡核苷酸,体外经退火形成双链DNA,与真核表达载体pTZU6+1连接,酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了两种靶向C35基因序列的siRNA表达载体。上述表达载体通过阳离子脂质体介导转染乳腺癌细胞T47D后,采用RT-PCR和Western?Blot实验以及MTT、TUNEL利Annexin?V/PI流式细胞分析法实验均证实C35siRNA具有较强抑制乳腺癌细胞生长的作用,可以在制备抗肿瘤的药物中应用。