简介： 本发明涉及一种由包含微颗粒作为生物亲和性 结合固相，标以双光子荧光染料的生物特异第二试剂的生物流 体或悬浮液测量分析物的无分离生物分析方法，包括：将激光 聚焦到反应悬浮液中，当单个微颗粒无规漂浮或被激发激光的 辐射压力引导通过焦点区的激光束时由其测量双光子激发荧 光，其中使用一种双光子荧光二吡咯亚甲基二氟化硼染料。该 染料具有结构(II)；和至少一个基团R1，R2，R3，R4，R5，R6或R7被取代得到一种可用于选择共价键接到其它分子上的化学反应性基团，和至少一个基团R1，R2，R3，R4，R5，R6或R7p被取代得到一种水增溶基团。