简介： 本发明涉及一种基于肽段C末端选择性酶标记的质谱从头测序方法及其应用。所述的方法是在肽段C末端酰胺酶的催化作用下，肽段C末端的羧基直接通过酰胺化反应标记上带碱性基团的小分子或者先通过酰胺化反应标记上带氨基的不饱和烃类，进一步通过叠氮‑炔基或者巯基‑烯的点击化学反应连接上碱性功能分子。肽段C末端标记上的碱性分子增加二级质谱中y离子的数目，提高肽段在质谱中的响应和碎裂效率，从而实现肽段测序。