简介： 本发明公开了一种维生素K环氧化物还原酶体外活性测定方法及其应用，属于生物化学技术领域。在维生素K循环中，γ‑谷氨酸羧化酶(GGCX)利用二氢维生素K(KH₂)为辅因子催化凝血因子Gla结构域的谷氨酸残基γ羧基化，同时把KH₂转化为维生素K环氧化物(KO)；维生素K环氧化物还原酶(VKOR)催化KO到K，以及K到KH₂，使维生素K可以循环利用。本发明的检测原理是利用产物KH₂在250nm的激发光下可以产生荧光的特性，通过检测产物KH₂的生成量来反映VKOR蛋白的活性；该方法步骤简单，可操作性强，相较传统微粒体法可以快速、实时、高通量地检测VKOR蛋白催化KO或K的活性；采用该方法可有效筛选出靶向VKOR的小分子抑制剂。