简介： 本发明涉及一种转肽酶生化检验试剂底物的制备方法，属于化学合成的技术领域，制备方法以5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与化合物A邻苯二甲酰‑L‑谷氨酸酐为起始原料，具体包括以下步骤：步骤(1)：5‑氨基‑2‑硝基苯甲酸与化合物A邻苯二甲酰‑L‑谷氨酸酐在酸性溶剂中反应合成中间体B；步骤(2)：在溶剂中，将所述中间体B和水合肼进行如下所示的反应，在离子交换树脂作用下铵根化得到化合物Glupa‑C，本发明的制备方法对γ‑谷氨酰‑3‑羧基‑4‑硝基苯胺单铵盐的制备工艺、反应条件和方法进行了改进和优化，使得产品的产率和纯度得到大幅度提高，且制备工艺简便安全，易于放大，适合于工业生产。