简介： 本发明公开了一种基于亚甲基蓝探针同时检测两种肿瘤标志物的生物传感器及其构建方法和应用，生物传感器包括肿瘤标志物适体I和含亚甲基蓝探针的肿瘤标志物适体II；其构建方法为：将巯基修饰的DNA通过化学键合固定在电极上，在所述DNA上依次通过互补修饰MUC1适体和含亚甲基蓝探针的CEA适体，即得。该生物传感器可以用来分别检测两种不同肿瘤标志物，也可以在同一界面上连续检测两种不同肿瘤标志物，且具有检测更简单、检出限低、灵敏度高、特异性强的特点。