简介： 本发明属于生物领域，具体地涉及一种胰蛋白酶活性检测的方法。本发明多肽在胰蛋白酶酶切前后与负载电化学活性分子硫堇的氧化石墨烯间相互作用的差异构建了一种简便的检测胰蛋白酶活性的方法，氧化石墨烯具有较大的比表面积，可以负载大量的硫堇，起到电化学信号放大的，提高检测的灵敏度；本发明通过底物多肽通过末端半胱氨酸的巯基与金形成金巯键共价修饰到金电极表面，带有巯基的多肽共价修饰至金表面，然后用巯基己醇占位，去除非特异性吸附的多肽，封闭电极表面空白位置，底物多肽序列N末端组氨酸，组氨酸带正电荷，富含羧基的氧化石墨烯解离后带负电荷，两者之存在较强的静电相互作，从而使所制备得到的复合物吸附至最终修饰电极产物。