简介： 本发明提供了一种修饰的PNP及其制备和在5’‑核苷酸酶检测中的应用，涉及到医学免疫体外诊断领域，所述修饰的PNP为PNP的氨基酸侧链经酰化修饰。并由其制备了稳定的5’‑核苷酸检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1包括缓冲液、4‑AA、修饰的嘌呤核苷磷酸氧化酶、过氧化物酶、黄嘌呤氧化酶、防腐剂、除干扰剂；所述试剂R2包括缓冲液，5’‑核苷磷酸盐。本发明对5’核苷酸酶检测的酶比色法加以改进，通过对参与反应的嘌呤核苷磷酸氧化酶(PNP)进行化学修饰，使试剂抗干扰能力增强达到灵敏度高的效果。