简介:
本发明公开了一种去泛素化酶的活性检测方法,包括以下步骤:S1、将去泛素化酶,底物和反应缓冲液置于冰上解冻,将荧光素检测试剂置于室温,避光;S2、配制含有10mM DTT的1X反应缓冲液,并以含有10mM DTT的1X反应缓冲液分别配制去泛素化酶工作溶液与底物工作溶液;与传统荧光分析法相比,本发明中的化学发光方法表现出更宽的线性范围,更高的灵敏度和更低的检测限,因此能获得更高可靠性的检测数据;在获得同等结果的前提下,通过氨基荧光素标记泛素(Ub‑AML)作为发光底物所需要的酶量,低于传统荧光法所需酶量几百甚至几千倍,从而极大的降低了高通量药物筛选的成本。
本发明公开了一种去泛素化酶的活性检测方法,包括以下步骤:S1、将去泛素化酶,底物和反应缓冲液置于冰上解冻,将荧光素检测试剂置于室温,避光;S2、配制含有10mM DTT的1X反应缓冲液,并以含有10mM DTT的1X反应缓冲液分别配制去泛素化酶工作溶液与底物工作溶液;与传统荧光分析法相比,本发明中的化学发光方法表现出更宽的线性范围,更高的灵敏度和更低的检测限,因此能获得更高可靠性的检测数据;在获得同等结果的前提下,通过氨基荧光素标记泛素(Ub‑AML)作为发光底物所需要的酶量,低于传统荧光法所需酶量几百甚至几千倍,从而极大的降低了高通量药物筛选的成本。