简介： 本发明属于电化学免疫传感领域，公开一种多重定量电化学免疫传感器及其构建方法，传感器包括检测探针，检测探针表面设置有：自组装分子层，与所述检测探针表面连接；捕捉抗体，与所述自组装分子层连接，用于捕捉总目标物蛋白所述总目标物蛋白包括磷酸化目标物蛋白和未磷酸化目标物蛋白；功能化电化学标记物，连接所述磷酸化目标物蛋白，用于在电化学测量时放大信号。本发明的多重定量电化学免疫传感器能够在一个样品溶液中同时捕获包含磷酸化目标物蛋白和未磷酸化目标物蛋白的总目标物蛋白；再通过功能化电化学标记物特异性捕获并定量检测磷酸化目标物蛋白，从而得到蛋白质磷酸化的水平程度。