简介： 本发明属蛋白质分析技术领域，具体为一种二/三甲基化（Kme2/3）修饰肽段富集和质谱分析的方法。本发明方法包括：对蛋白上未修饰（Kme0）或者单甲基化（Kme1）修饰的赖氨酸进行衍生化使其带上生物素标记，再将蛋白酶解成肽段后，再加入亲和素偶联的琼脂糖微球，通过生物素和亲和素之间的高特异和高亲和作用，除去Kme0/1肽段，在上清中保留Kme2/3修饰肽段，最后利用除盐柱捕获上清中的肽段，送入质谱分析质谱分析Kme2/3修饰肽段。本发明方法首次实现对Kme2/3修饰肽段的化学富集，能显著地提高Kme2/3修饰肽段的分析质谱选择性，并且具有特异性强、重现性好、步骤简单、操作方便等特点。