简介： 本发明涉及一种检测凝血酶用生物电化学传感器其制备方法及应用。该传感器为三电极体系传感器，其中对电极为铂电极，参比电极为饱和甘汞电极，工作电极为功能化修饰的热解石墨电极，该功能化修饰的热解石墨电极是在热解石墨电极表面依次修饰有聚（二烯丙基二甲基氯化铵）、金纳米颗粒、葫芦[7]脲和循环混合液；所述的循环混合液中含有：100nMMB标记的探针DNA链、1nM延伸DNA链、1nM的凝血酶适体链、1.6unit/μL的T4DNA连接酶和0.4unit/μL的ExoIII。本发明利用凝血酶与适体的特异性结合能力，同时，借助连接酶辅助作用引发ExoIII的循环切割反应，并结合电化学快速灵敏的检测优势实现对凝血酶的高灵敏性检测。