简介： 本发明公开了一种干巴菌菌种的分离培养方法，包括采样、表面灭菌、分离及纯培养步骤，具体包括：在云南松林地中选择幼嫩的干巴菌子实体进行采样并进行保藏；将采集的干巴菌子实体进行表面灭菌处理；切取干巴菌子实体置入干巴菌组织分离培养基的培养基平面或试管斜面中，培养，再接种至干巴菌固体培养基的培养基平面或试管斜面中，培养得到目标物，移入含有针叶林废弃物做培养基质的干巴菌菌种培养基的试管斜面保存。本发明是选用野生干巴菌的幼嫩子实体活体，在云南松生长干巴菌的林地现场采集，迅速组织分离，用松树皮、松木屑、松毛等针叶林废弃物做培养基质培养得到，得到的干巴菌菌种繁殖稳定性好、成活率达99.9%以上且长势良好。